肥料中蛔虫卵死亡率的测定 GB/T 19524.2—2004

2017-04-19  来自: 鹤壁市百惠生物科技有限公司 浏?#26469;?#25968;:674

1 范围

本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。

2 测定方法原理

将碱性溶液与肥料样品充分混合,分离蛔虫卵,然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液,使蛔虫卵漂浮在溶液的表面,从而收集检验。

3  试验方法

3.1  仪器设备(略)

3.2  试剂(略)

3.3   检验程序

3.3.1  蛔虫卵分离

称取5.0~10.0?g样品(颗粒较大的样品应先进行研磨),放于容量为50?mL离心管中,注入NaOH溶液25~30?mL,另加玻璃珠约10粒,用橡皮塞塞紧管口,放置在振荡器上,静置30?min后,以200~300?r/?min频率振荡10~15?min。振荡完毕,取下离心管上的橡皮塞,用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀,再次用橡皮塞塞紧管口,静置15~30?min 后,振荡10~15?min。

3.3.2  离心沉淀

从振荡器上取下离心管,拔掉橡皮塞,用滴管吸取蒸馏水,将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中,以2000~2500?r/?min速度离心3~5?min后,弃去上清液。然后加适量蒸馏水,并用玻璃棒将沉淀物搅起,按上述方法重复洗涤三次。

3.3.3  离心漂浮

往离心管中加入少量饱和?NaNO3?溶液,用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后,再徐徐添加饱和?NaNO3?溶液,随加随?#31890;?#30452;加到离管口约1?cm为止,用饱和?NaNO3?溶液冲洗玻璃棒,洗液并入离心管中,以2000~2500?r/?min速度离心3~5?min。

用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中,约30次后,适当增加一些饱和NaNO3?溶液于离心管中,再次搅拌、离心及移置液膜,如此反复操作?#22330;?#27425;,直到液膜?#31185;?#35266;察不到蛔虫卵为止。

3.3.4       抽?#21496;?#26816;

将烧杯中混合悬液,通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼?#19979;?#26007;抽滤。若混合悬液的浑浊度大,可更换滤膜。

抽滤完毕,用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下,置于载玻片上,滴加二、三滴甘油溶液,于低?#26029;?#24494;镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。当观察有蛔虫卵时,将含有蛔虫卵的滤膜进行培养。

3.3.5       培养

在培养皿的底?#31185;?#38138;一层厚约1?cm?的脱脂棉,脱脂棉上铺一张?#26412;?#19982;培养皿相适的普通滤纸。为防止霉菌和原生动物的繁殖,可加入甲醛溶液或甲醛生理盐水,以浸透滤纸和脱脂棉为宜。

将含蛔虫卵的滤膜平铺在滤纸上,培养皿加盖后置于恒温培养箱中,在28?℃~30?℃?条件下培养,培养过程中经常滴加蒸馏水或甲醛溶液,使滤膜保持潮湿状态。

3.3.6  镜检

培养10~15?d?,自培养皿中取出滤膜置于载玻片上,滴加甘油溶液,使其透明后,在低倍镜下查找蛔虫卵,然后在高倍镜下根据形态,鉴定卵的死活,并加?#32422;?#25968;。镜检时若感觉视野的亮度和膜的透明度不够,可在载玻片?#31995;?#19968;滴蒸馏水,用盖玻片从滤膜上刮下少许含卵滤渣,与水混合均匀,盖上盖玻片进行镜检。

3.3.7  判定

凡含有幼虫的,都认为是活卵,未孵化或单细胞的都判为死卵。

3.3.8       结果计算

K=100(N1-N2)/ N1

式中:

K?—蛔虫卵死亡率(%)

N1—镜检总卵数

N2—培养后镜检活卵数

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